线粒体膜电位荧光探针-细胞膜-标记二抗-上海复申生物科技有限公司

BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強(qiáng)型）

產(chǎn)品信息

BCA蛋白濃度測定試劑盒（蛋白提取與定量）BCA蛋白濃度測定試劑盒（蛋白提取與定量）

 產(chǎn)品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為用戶制作標(biāo)準(zhǔn)曲線提供了便利。

該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測，也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量（100μl）的蛋白樣品，但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質(zhì)帶來的影響。后者操作簡單方便，僅需少量（10-25μl）的蛋白樣品。不過，由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低**檢測水平。我司提供三種規(guī)格的BCA蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做50次，250次，500次。酶標(biāo)法分別可做500次，2500次，以及5000次。

產(chǎn)品特點

1. 靈敏度高，小檢測蛋白量可達(dá)0.2μg，檢測濃度下限達(dá)到10μg/ml。
2. 速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統(tǒng)的Lowry法檢測速度約快4倍。
3. 線性范圍廣，20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。
4. 不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。（詳情見附錄）

室溫運輸。試劑盒室溫保存即可，其中短期不用的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA）也可放到4 ºC保存。有效期12個月。

注意事項

1. 使用BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，因此需注意保持定時和定溫，以確保精確定量。
2. 低溫或長期保存，若發(fā)現(xiàn)BCA試劑A或者試劑B有沉淀發(fā)生。請37ºC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染，則應(yīng)丟棄，避免對實驗結(jié)果造成影響。
3. 實驗操作規(guī)范，提高上樣量的精確度。
4. 每次測定都需做相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，因為顯色反應(yīng)與溫度和時間的變化有關(guān)，精準(zhǔn)的蛋白定量宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作方法

一、配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液

1. 配制BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系

注：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進(jìn)行稀釋。

BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制可參考表一。

表一BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（微孔板檢測，線性范圍20-2000μg/ml）*

*如用比色皿檢測，每管需加100μl標(biāo)準(zhǔn)品，按3個重復(fù)計算，每個濃度至少需配制300μl。

2. 配制BCA工作液

1. 計算所需要的總BCA工作液體積。
2. BCA工作液體積=（標(biāo)準(zhǔn)品+待測樣品）×重復(fù)數(shù)×每個樣品所需要的BCA工作液
3. 2.0ml BCA工作液，微孔板檢測每個樣品加200μl BCA工作液。
4. 配制BCA工作液：50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1） ，充分混勻。
5. BCA試劑B加入BCA試劑A中后，迅速渾濁，通過混勻后立即變澄清。BCA工作液裝入密封容器內(nèi)，室溫條件24h穩(wěn)定。

二、檢測方法

1. 比色皿檢測方法（樣品：BCA工作液=1:20）

1)    各取100μl標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到反應(yīng)管中。

2)    每管加入2.0ml BCA工作液，混勻。37℃孵育30min。

注意：也可室溫孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA檢測蛋白濃度，延長孵育時間會加深顏色反應(yīng)。升高溫度會加快顯色反應(yīng)。但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長孵育時間。

1. 冷卻到室溫。在分光光度計上進(jìn)行檢測，設(shè)定波長為562nm。用裝滿水的比色皿對儀器校零。然后在10分鐘內(nèi)對所有樣品讀數(shù)。
2. ：由于BCA反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會繼續(xù)。但是，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)停虼巳羰?/span>10min內(nèi)能對所有的樣本進(jìn)行562nm吸光度的測試，不會導(dǎo)致明顯錯誤。
3. 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度ug/ml；Y-終的OD562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。

2. 微孔板檢測方法（樣品：BCA工作液=1:8）

1)    各取25μl標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到微孔板中。

注：樣品與工作液比例為1:8，若樣品有限，可使用10μl標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測樣品進(jìn)行檢測（即1:20），這時試劑盒的檢測范圍為125-2000μg/ml。

2)    每孔加入200μl BCA工作液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，37℃孵育30min。

1. 冷卻到室溫，在酶標(biāo)儀上的540～595nm波長范圍處檢測吸光度，其中562nm波長為**。
2. a）由于酶標(biāo)板的光徑比比色皿短，使得酶標(biāo)板檢測需要更好的樣品：BCA工作比率來獲得相同的檢測靈敏度。若使用高于562nm的檢測波長，建議延長孵育時間到2h。b）延長孵育時間或者提高樣品：BCA工作比會增高每個孔的OD562nm凈值，并且降低檢測下限和工作線性范圍。
3. 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度ug/ml；Y-終的OD562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。