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  • 核酸提取純化原則要求及效率影響因素分析
  • 點擊次數:4303 更新時間:2020-09-16
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  •   核酸中因為嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA鈉鹽的紫外吸收在260nm附近,其吸光率以A260表示,在230nm處于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度計對核酸進行定量及定性測定。
     
      全自動核酸提取因其具有快速高效、簡單易用以及安全無毒等特點迅速得到推廣應用,成為實驗室的標配。
     
      核酸提取純化原則和要求
     
      1、保證核酸一級結構的完整性;
     
      2、排除其它分子的污染(如提取DNA時排除RNA的干擾);
     
      3、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和高濃度的金屬離子;
     
      4、盡可能降低蛋白質、多糖和脂類等大分子物質;
     
      核酸提取純化方法:
     
      1、熱裂解堿法
     
      堿法提取主要是利用共價閉合環狀質粒與線性染色質在拓撲學上的差異來分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。
     
      2、煮沸裂解法
     
      加熱處理DNA溶液,利用線性DNA分子的特性,通過離心將DNA段與變性蛋白質和細胞碎片形成的沉淀分離。
     
      3、納米磁珠法
     
      運用納米技術對超順磁性納米顆粒的表面進行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。
     
      4、酚/抽提法
     
      1956年發明,通過酚/處理細胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機相中主要是脂類物質,蛋白質位于兩相之間。
     
      5、醇沉淀法
     
      乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負電荷的磷酸基團暴露出來,NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團結合,形成沉淀。
     
      6、層析柱法
     
      通過特殊硅基質吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質順利通過,然后利用高鹽低PH結合核酸,低鹽高PH值洗脫,來分離純化核酸。
     
      7、其他方法
     
      除了上述常用的方法之外,還有超聲法、反復凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。
     
      提取效率影響因素
     
      磁珠提取由裂解、洗滌和洗脫等步驟組成,影響這些步驟的因素同樣也會影響磁珠的提取效率。
     
  • 上一篇:熒光探針的操作方法和注意事項(僅作參考)
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